一、洗板機(jī)機(jī)理的研究
1、 快速的、與殘留液量相關(guān)的直接稀釋過(guò)程;
2、 受擴(kuò)散影響、與時(shí)間相關(guān)的殘留液層的間接稀釋過(guò)程;
3、 優(yōu)化洗液的運(yùn)動(dòng)可以降低殘留層,改善洗滌的效率,降低背景變異,提高整個(gè)
試驗(yàn)的靈敏度;
4、 相同的振幅與頻率對(duì)洗滌效果有影響;
5、 循環(huán)次數(shù)、浸泡時(shí)間、沖洗壓力、沖洗時(shí)間對(duì)洗滌效果的影響在以上研究中,
有指導(dǎo)意義的是關(guān)于兩個(gè)物理過(guò)程的分析,與殘留量相關(guān)的直接稀釋要求盡可能少的殘留量,與反應(yīng)相關(guān)的間接稀釋?zhuān)笥幸欢ǖ慕輹r(shí)間。另外,多次洗滌對(duì)效果有改進(jìn);底部沖洗由于距離近,沖力大,可改善洗滌效果。
二、洗板機(jī)的發(fā)展?fàn)顩r
洗板儀器的發(fā)展,可以大致分為三個(gè)階段,簡(jiǎn)易型、自動(dòng)型、集成環(huán)境式洗板機(jī)。
1、簡(jiǎn)易型也可稱(chēng)為手動(dòng)式洗板器,一般由負(fù)壓泵與清洗頭可完成最基本的吸液,也有可完成加液動(dòng)作的裝置。這類(lèi)裝置,由于成本極低,使用方便,工作量不大時(shí)可以使用。
2、自動(dòng)式洗板機(jī):可根據(jù)用戶(hù)的設(shè)置完成規(guī)定次數(shù)與條數(shù)的洗板工作,有的具有簡(jiǎn)單的存貯功能。主要目的是利用自動(dòng)化技術(shù),替代手工勞動(dòng)。其中有條式與板式之分。如LABSYSTEM的W4、BIO-RAD早期的1250、拓普公司的DEM-2等。
3、集成環(huán)境式洗板機(jī)是隨著ELISA的發(fā)展、由儀器生產(chǎn)廠商根據(jù)ELISA應(yīng)用專(zhuān)家的建議,結(jié)合各自對(duì)洗板技術(shù)的研究而發(fā)展起來(lái)的,其特點(diǎn)在于提供良好的洗板環(huán)境,強(qiáng)調(diào)洗滌效果而非自動(dòng)化,具有一定的智能特性,如LABSYSTEM的ACSENT WASH,拓普的DEM-3等。
4、洗板環(huán)境實(shí)際上是一組有利于改進(jìn)洗滌效果的參數(shù)及洗滌動(dòng)作。對(duì)于具體應(yīng)用來(lái)說(shuō),有的很實(shí)用,效果也不錯(cuò),如底部沖洗、兩點(diǎn)吸液、震動(dòng)、交叉吸液(漂洗)等;有的只有廠家的廣告詞而已。精心設(shè)計(jì)的洗板條件確實(shí)可以取得很好的效果。
5、符合中國(guó)ELISA應(yīng)用具體情況的洗板機(jī),除了洗滌徹底、穩(wěn)定、可靠的要求外,還應(yīng)具有:中文顯示、操作簡(jiǎn)便、具有微孔板位置調(diào)節(jié)功能、配件方便且價(jià)格合理、售后服務(wù)良好,具有兩點(diǎn)吸液、底部沖洗、交叉吸液等功能,可洗滌48孔板等。
三、國(guó)內(nèi)常見(jiàn)洗板機(jī)簡(jiǎn)介
洗板,是PCR ELISA實(shí)驗(yàn)中重要的操作程序,是避免產(chǎn)物污染的關(guān)鍵步驟。另外,洗板的好壞,直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。在沒(méi)有洗板機(jī)的情況下,PCR ELISA實(shí)驗(yàn)中洗板是整個(gè)實(shí)驗(yàn)中控制污染的重要環(huán)節(jié),須十分小心操作。正確使用洗板機(jī),采用相應(yīng)的防污染措施可減少污染機(jī)會(huì)。
中國(guó)市場(chǎng)常見(jiàn)的洗板機(jī)一覽表
生產(chǎn) 廠家 | 產(chǎn)品 型號(hào) | 適用 微孔板 | 清洗 頭 | 加液量 (uL) | 殘留量 (uL) | 浸泡 時(shí)間 | 震 動(dòng) | 兩點(diǎn) 吸液 | 底部 沖洗 | 洗液 種類(lèi) |
拓普 | DEM-2 | 96/48 | 8/12 | 0-500 | <6 | 0-600s | 無(wú) | 無(wú) | 有 | 1 |
拓普 | DEM-3 | 96/48 | 8/12 | 0-500 | <2 | 0-240s | 有 | 有 | 有 | 1 |
拓普 | DEM-3A | 96/48 | 8/12 | 50-3600 | <2 | 0-240s | 有 | 有 | 有 | 2 |
上海雷勃 | Well wash4 | 96 | 8/12 | 0-750 | <5 | 0-600s | 無(wú) | 無(wú) | 無(wú) | 1 |
雷勃 | Well wash | 96 | 8/12 | 50-1000 | <3standard | 1-3600s | 有 | Sweep | 無(wú) | 2 |
Labsystem | Ascent |
| 16/24 |
| <1sweep |
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|
Bio-Rad | 1250 | 96 | 8/12 | 50-400 | <5 | 0-250s | 無(wú) | 無(wú) | 無(wú) | 1 |
Bio-Rad | 1575 | 96 | 8/12 | 50-3000 | <2 | 0-59Min | 有 | Sweep | 有 | 1 |
Bio-Tek | Elx50 | 96 | 8/12 | 50-3000 | <5 | 0-600s | 有 | - | - | 1 |
Awarenes | Fax2600 | 96 | 8/12 | 0-500 | <3 | 0-99Min | 無(wú) | 無(wú) | 無(wú) | 1 |
TECAN | Columbus | 96 | 8/12 | 50-3000 | <2 | 1-24h | 有 | 有 | 有 | 2 |
四、選購(gòu)洗板機(jī)的注意事項(xiàng)
1、關(guān)鍵指標(biāo):殘留量:<2uL
能否提供可選擇的洗板環(huán)境:洗板次數(shù)、條數(shù)、浸泡時(shí)間等是洗板機(jī)的基本參數(shù),一般均可滿(mǎn)足。建議選擇具有底部沖洗、兩點(diǎn)吸液等功能的儀器;底部沖洗有利于減小微孔板底部的干擾性吸附;兩點(diǎn)吸液可大大降低微孔液體殘留量。這對(duì)改進(jìn)洗滌效果很有效。最小的殘留量對(duì)PCR ELISA非常重要,因?yàn)樵赑CR ELISA操作中不允許拍板,以防污染。
2、是否對(duì)國(guó)產(chǎn)試劑盒具有兼容性與擴(kuò)展性
兼容性主要是對(duì)于國(guó)內(nèi)不同規(guī)格、尺寸略有差異的微孔板的兼容,儀器應(yīng)具有對(duì)微孔板的位置調(diào)節(jié)功能,適應(yīng)國(guó)內(nèi)試劑的實(shí)際情況。擴(kuò)展性主要是為了適應(yīng)新出現(xiàn)的一些應(yīng)用情況,如上??迫A新增加的86式微孔板,許多洗板機(jī)無(wú)法清洗。
3、考察儀器的可靠性與洗滌效果的可靠性
一是儀器自身的可靠性,保證儀器在使用壽命期內(nèi)可以正常顯示、精確運(yùn)動(dòng)等,這可通過(guò)考查儀器生產(chǎn)廠商的技術(shù)與生產(chǎn)實(shí)力;一是洗滌效果的可靠性,即真正達(dá)到代替手工洗滌、甚至優(yōu)于手工洗滌的目的,這需要咨詢(xún)使用該儀器的上級(jí)單位或典型用戶(hù)。
4、配件是否充分
廠方是否可以提供常用的、易損的配件,如清洗頭、應(yīng)該8道、12道各備用一個(gè),并且定期淘汰,象洗液瓶、硅膠管等應(yīng)方便買(mǎi)到。
5、售后服務(wù)是否及時(shí)、價(jià)格是否合理
洗板機(jī)是使用率相對(duì)較高的儀器,單從運(yùn)動(dòng)角度對(duì)比,其頻率是酶標(biāo)儀的幾十倍,有的醫(yī)院使用兩年就報(bào)廢,原因在于沒(méi)有售后服務(wù)或售后服務(wù)價(jià)格太高,有的僅因?yàn)槿鄙僖粋€(gè)配件而使整機(jī)報(bào)廢,十分可惜。故及時(shí)的售后服務(wù)與相對(duì)合理的服務(wù)價(jià)格,是購(gòu)買(mǎi)洗板機(jī)應(yīng)考慮的因素。從保證洗板機(jī)效果的角度,建議用戶(hù)根據(jù)使用情況,對(duì)洗板機(jī)進(jìn)行定期的維護(hù),而不是被動(dòng)地等儀器不能工作時(shí)再去修理,這一工作可由廠家完成或在廠家協(xié)助下由有關(guān)人員完成。
6、人機(jī)界面是否友好,最好是中文顯示
五、洗板機(jī)使用中注意事項(xiàng)
1、 有一定地洗滌次數(shù):多次洗滌有利于取得好的效果,一般不超過(guò)6次。
2、 注意每孔的加液量:以加滿(mǎn)為宜,但不可溢出,一般為每控300微升。
3、 建議在洗滌前進(jìn)行位置調(diào)節(jié),吸針要到微孔底部,以降低殘留量。因?yàn)橐话鉋LISA
實(shí)驗(yàn)洗滌結(jié)束后要求扣板,但此步驟在PCR-ELISA中易造成污染,故殘留量應(yīng)盡量減少。不能象一般ELISA操作一樣用力扣板。
4、 建議用戶(hù)采用兩點(diǎn)吸液與底部沖洗方式,以得到好的洗滌效果。
5、 如果作PCR-ELISA液罐應(yīng)加有1%次氯酸鈉,加入的量不得少于產(chǎn)生廢液的量。每
天使用完畢后應(yīng)用1%次氯酸鈉沖洗管路及清洗頭,然后用雙蒸水沖洗管路。
6、 定期維護(hù)、檢修儀器及配件。