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熒光檢測器簡介
[ 2013/9/29 18:51:08 ] [轉(zhuǎn)載請注明來源:就是要儀器網(wǎng)]
原理
化合物受紫外光激發(fā)后,發(fā)射出比激發(fā)光波長更長的光,稱為熒光
熒光強(qiáng)度 (F) 與激發(fā)光強(qiáng)度 (I0) 及熒光物質(zhì)濃度 (C) 之間的關(guān)系為:F=2.3QKI0εCl
F=KC

 

對于稀溶液,熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)溶液濃度、摩爾吸光系數(shù)、吸收池厚度、入射光強(qiáng)度、熒光的量子效率及熒光的收集效率等成正相關(guān)。在其他因素保持不變的條件下,物質(zhì)的熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)溶液濃度成正比,這是熒光檢測器的定量基礎(chǔ)。熒光檢測器屬于溶質(zhì)型檢測器,可直接用于定量分析。
發(fā)射光譜
Q為量子產(chǎn)率,K為熒光效率,ε為摩爾吸光系數(shù),l為光徑長度
特點(diǎn)
選擇性高,只對熒光物質(zhì)有響應(yīng);靈敏度也高,最低檢出限可達(dá)10-12ug/ml,適合于多環(huán)芳烴及各種熒光物質(zhì)的痕量分析。也可用于檢測不發(fā)熒光但經(jīng)化學(xué)反應(yīng)后可發(fā)熒光的物質(zhì)。如在酚類分析中,多數(shù)酚類不發(fā)熒光,為此先經(jīng)處理使其變?yōu)闊晒馕镔|(zhì),而后進(jìn)行分析。
 
定量基礎(chǔ)
 
在光致發(fā)光中,發(fā)射出的輻射總依賴于所吸收的輻射量。由于一個(gè)受激發(fā)的分子回到基態(tài)時(shí)可能以無輻射躍遷的形式產(chǎn)生能量損失,因而發(fā)射輻射的光子數(shù)通常都少于吸收輻射的光子數(shù),它以量子效率Q來表示
固定的實(shí)驗(yàn)條件下,量子效率是個(gè)常數(shù),通常Q小于1。對可用熒光檢測的物質(zhì)來說,Q值一般在0.1~0.9之間。熒光強(qiáng)度F與吸收光強(qiáng)度成正比。
一般所說的熒光光譜,實(shí)際上僅指熒光發(fā)射光譜。它是在激發(fā)單色器波長固定時(shí),發(fā)射單色器進(jìn)行波長掃描所得的熒光強(qiáng)度隨熒光波長(即發(fā)射波長,Em)變化的曲線。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì),并作為熒光測定時(shí)選擇合適的測定波長的依據(jù)。
另外,由于熒光測量儀器的特性,使光源的能量分布、單色器的透射率和檢測器的響應(yīng)等性能會隨波長而變,所以同一化合物在不同的儀器上會得到不同的光譜圖,且彼此間無類比性,這種光譜稱為表觀光譜。要使同一化合物在不同的儀器上能得到具有相同特性的熒光光譜,則需要對儀器的上述特性進(jìn)行校正。經(jīng)過校正的光譜稱為真正的熒光光譜。
激發(fā)波長和發(fā)射波長是熒光檢測的必要參數(shù)。選擇合適的激發(fā)波長和發(fā)射波長,對檢測的靈敏度和選擇性都很重要,尤其是可以較大程度地提高檢測靈敏度。
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