生物技術(shù)的發(fā)展日新月異,隨著PCR技術(shù)在各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用,包括醫(yī)學(xué)方面疾病檢測(cè)、農(nóng)業(yè)方面轉(zhuǎn)基因檢測(cè)以及其他很多方面的應(yīng)用等,高通量的樣本核酸提取已經(jīng)變得極為迫切,很多公司推出了全自動(dòng)核酸提取的儀器,各種原理的都有,亂花漸欲迷人眼,有中看不中用的,貴還不好用的,如何選擇一款合適的核酸自動(dòng)提取儀,就得細(xì)細(xì)分析,免得花了冤枉錢,整一堆擺設(shè)回來。
從提取原理上來看,有離心柱法、磁珠法;離心柱法全自動(dòng)核酸提取儀采用離心機(jī)和自動(dòng)移液裝置想結(jié)合的方法,通量一般在1-12個(gè)樣本,時(shí)間上和手工提取差不多,并不能提高效率,價(jià)格也不便宜,耗材還不通用,適合錢多的實(shí)驗(yàn)室使用。
磁珠法自動(dòng)
核酸提取儀又分為磁棒法和抽吸法,先說抽吸法,顧名思義,抽吸法就是通過自動(dòng)移液裝置來進(jìn)行,通過自動(dòng)移液裝置來加入裂解液、磁珠吸附;抽走裂解液,加入漂洗液,磁珠吸附,抽走漂洗液,加入洗脫緩沖液。從步驟上好像沒什么問題,但是抽吸法最大的問題在于,為了在去除廢液的時(shí)候不抽走磁珠,移液器不能靠磁珠太近,以防磁珠連同廢液被抽掉,這樣每一次抽廢液的時(shí)候總有一小部分不能徹底的抽走,特別是磁鐵在底部的裝置,因?yàn)榇胖楸淮盆F吸附在底部,所以移液器不能靠底部太近,這樣漂洗液就不能完全去除,殘留的漂洗液中的鹽和乙醇會(huì)影響后面的洗脫效率和PCR成功率;磁鐵在側(cè)面的裝置殘留的液體會(huì)少些,但是洗脫的效率也不好,依靠DNA自行溶解到洗脫緩沖液中,除非等上半小時(shí)以上,所以有些96自動(dòng)核酸提取工作站,提取一輪的時(shí)間需要150分鐘,32磁棒法的同樣的時(shí)間可以提5輪了。
再說磁棒法
核酸提取儀,通量通常有8、16、32、96通道,相對(duì)于抽吸法,磁棒法的優(yōu)點(diǎn)是每一步的液體不殘留,因?yàn)榇虐糁粠ё叽胖?,轉(zhuǎn)移到下一個(gè)步驟相應(yīng)的反應(yīng)孔中,另外選擇磁棒法的提取儀器最好要功能更齊全的,比如可以加熱,每個(gè)加熱槽最好獨(dú)立溫控,這樣可以設(shè)置加熱、裂解、洗脫的不同溫度,另外很重要的一點(diǎn)是,帶動(dòng)磁棒的電機(jī)要能帶動(dòng)磁棒進(jìn)行液體的快速混勻和攪拌,這樣才有利于自動(dòng)化和有助于裂解和漂洗徹底。磁棒法的通量選擇最好是32通道,96通道的看似通量更高,但是有個(gè)很現(xiàn)實(shí)的問題,96個(gè)磁力棒在從一個(gè)板轉(zhuǎn)移至另外一個(gè)板的時(shí)候,磁力棒上面的液體中途滴下來怎么辦,它會(huì)滴到別的孔中造成污染,而32通道的磁力棒運(yùn)行軌跡不經(jīng)過其他樣本的上空,這樣不會(huì)交叉污染。